09月22日, 2014 209次
PCR技术的基本原理⑴PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 本回答被网友采纳
江苏卷几乎每年都有这样的计算题，自己上网搜索一下。例如33．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。 图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 。②在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。 ①第1组： ； ②第2组： 。答案： (1)①15/16 ②三 (2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 ②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
这一部分的计算还是关于DNA复制1.一个DNA分子用P标记作为模板进行PCR,经N次复制，原材料不标记。问：被标记的DNA分子有多少个？ 被标记的DNA占多少？标记的单链占多少？
pcr技术是体外复制DNA技术，循环一次得到2个DNA，循环2次得到4个DNA，循坏3次得到8个DNA，在这8个DNA中，理想目的基因数目是2个，占整个DNA总数的1/4。
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在聚合作用的起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中，引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。 没有引物的话，DNA聚合酶是没有办法延长DNA链的http://baike.baidu.com/view/352480.htm?fr=ala0_1_1 这里有介绍
1.两段DNA片段2.用来与DNA连接使DNA复制开始3.有3端但没5端
这张图还是蛮清楚的。我们想要的是与双实线一边长的DNA片段(即抛却两端虚线部分)进行到第三轮即与题目所给图片相符。在第四轮的时候问基因1，本质是问第四轮有多少实线等长DNA片段，依据半保留复制，数第三轮纯实线DNA单链数，有8条 本回答由网友推荐
基因工程/转基因技术，蛋白质工程，植物组织培养，动物细胞培养，植物细胞杂交/融合，动物细胞杂交/融合，核移植，单克隆抗体，体外受精，早期胚胎培养，胚胎移植，胚胎分割注意:PCR，分子杂交等等那些不与上面列出来的技术放在同一类，答题时要认真审题。同时要区别"技术"和"原理"，这两个是完全不同的概念。