09月22日, 2014 130次
这个细胞很好养，我们实验室就养的这种细胞，细胞喜欢聚集在一起成岛屿状，隔天传代，一般一传三，用的培养基是DMEM+10%FBS 追问 呵呵，谢谢，我在网上查了好久，都没查到，那在请问一下哈，怎么确定它长到对数期了呢，因为我们要取对数期细胞做药物处理。。。谢谢哈 追答 我们实验室一般是这样判断，先等细胞铺满培养瓶的90%后，传代，再至铺满培养瓶的50—60%时为对数期，进行转染或其它处理 本回答由提问者推荐
HBV+的？ 和HepG2一样DMEM+10%FBS就可以了吧
HBV DNA的提取材料与试剂l)细胞裂解液0.6%/0.olM EDTA pH7.52)SM NaCI:29.2gNaCI(AR级)溶于80ml去离子水中定容至100ml，高压灭菌，室温保存。3)RNase，进口分装，Sigma公司产品。4)TE缓冲液:10InM Tris一HCL(pHS.0)/0.01M EDTA(pHS.0)5)平衡酚溶液:10InM Trls一HCL，pH8.0平衡至pH大于7.8。6)酚/氯仿/异戊醇(25:24:l)7)氯仿/异戊醇(24:l)8)10M乙酸钱9)10%PEG800010)蛋白酶K:以无菌去离子水配制成ZOmg/me--Zo℃保存11)高速冷冻离心机12)水浴锅.方法1)细胞内游离病毒DNA提取:2.2.15细胞接种于培养瓶中，按Hirt介绍的方法提取HBV DNA‘2。以D一Hank’s液洗涤细胞2次，消化液消化，再以D一Hank’s液洗涤2次，离心，加入10倍体积的裂解液，室温裂解20分钟，加入5MNaCL至终浓度lM，4度静置8小时，以17000G4度离心30分钟，留取上e799bee5baa6e997aee7ad94e78988e69d8331333363366239清，上清以RNase(终浓度50ug/ml)37度消化2小时，加等体积酚/氯仿/异戊醇抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于50ulTE缓冲液中。一20℃2)细胞外的游、离病毒DNA的提取:按照Sells等介绍的方法‘“，取培养上清30ml，低速离心，去沉淀后，加入PEG8000终浓度10%(W/V)4度1小时10000G4度离心10分钟，以10mM TriS一HCL PH7.5/10mM EDTA重悬沉淀，以蛋白酶K(终浓度4O0ug/ml)37℃消化2小时，酚/氯仿抽提，醋酸按和乙醇沉淀10mM Tris一HCC重悬沉淀，加入Rnase至终浓度(50mg/me)消化2小时，酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于5Ou1TE中。取5u1DNA溶液稀释100倍测定0D260/OD28O以确定DNA的浓度和纯度。DNA的浓度(ug/ul)=OD26oX稀释倍数/20获得的病毒DNA的样品用于转移引迹,酶联显色。这是我从网上查到的,现在还没做到这里,不知道有帮助没有
齐氏生物一般推荐 高糖DMEM和1640均可以，另外加10%FBS.
具体求助什么问题呢？
HepG2.2.15细胞是人肝癌细胞系HepG2细胞衍生来，被稳定源转染HBV基因以后可以稳定的进行HBV 基因组的复制，细胞上清也百可以测得到HBV DNA。因为度已经有HBV基因整合进问去，一般不用他做转染，做转染用HepG2细胞或者Huh7细胞比较多。答