09月22日, 2014 216次
HBV DNA的提取材料与试剂l)细胞裂解液0.6%/0.olM EDTA pH7.52)SM NaCI:29.2gNaCI(AR级)溶于80ml去离子水中定容至100ml，高压灭菌，室温保存。3)RNase，进口分装，Sigma公司产品。4)TE缓冲液:10InM Tris一HCL(pHS.0)/0.01M EDTA(pHS.0)5)平衡酚溶液:10InM Trls一HCL，pH8.0平衡至pH大于7.8。6)酚/氯仿/异戊醇(25:24:l)7)氯仿/异戊醇(24:l)8)10M乙酸钱9)10%PEG800010)蛋白酶K:以无菌去离子水配制成ZOmg/me--Zo℃保存11)高速冷冻离心机12)水浴锅.方法1)细胞内游离病毒DNA提取:2.2.15细胞接种于培养瓶中，按Hirt介绍的方法提取HBV DNA‘2。以D一Hank’s液洗涤细胞2次，消化液消化，再以D一Hank’s液洗涤2次，离心，加e69da5e887aae799bee5baa6e79fa5e9819331333363366239入10倍体积的裂解液，室温裂解20分钟，加入5MNaCL至终浓度lM，4度静置8小时，以17000G4度离心30分钟，留取上清，上清以RNase(终浓度50ug/ml)37度消化2小时，加等体积酚/氯仿/异戊醇抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于50ulTE缓冲液中。一20℃2)细胞外的游、离病毒DNA的提取:按照Sells等介绍的方法‘“，取培养上清30ml，低速离心，去沉淀后，加入PEG8000终浓度10%(W/V)4度1小时10000G4度离心10分钟，以10mM TriS一HCL PH7.5/10mM EDTA重悬沉淀，以蛋白酶K(终浓度4O0ug/ml)37℃消化2小时，酚/氯仿抽提，醋酸按和乙醇沉淀10mM Tris一HCC重悬沉淀，加入Rnase至终浓度(50mg/me)消化2小时，酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，沉淀重悬于5Ou1TE中。取5u1DNA溶液稀释100倍测定0D260/OD28O以确定DNA的浓度和纯度。DNA的浓度(ug/ul)=OD26oX稀释倍数/20获得的病毒DNA的样品用于转移引迹,酶联显色。这是我从网上查到的,现在还没做到这里,不知道有帮助没有
HepG2.2.15细胞是人肝癌细胞系HepG2细胞衍生，被稳定转染HBV基因以后可以稳定的进行HBV 基因组的复制，细胞上清也可以测得到抄HBV DNA。养这种细胞当然要注意安全了，自己要有袭乙肝抗体、操作带口罩，实验操作要规范。。建议你们先去查自己的肝功能，有没有zhidao乙肝抗体，没有的话 赶快打疫苗。。。不过，不必太害怕以至于 有点过度紧张。。。只要有所准备就行
这个问题确认了吗？我们实验室为了试验引进了HepG2 2.2.15细胞，实验室人都很害怕，有没有相关的资料可以证实下这个没有人身安全问题 本回答被网友采纳
你想多了。。不需要。。
这个细胞很好养，我们实验室就养的这种细胞，细胞喜欢聚集在一起成岛屿状，隔天传代，一般一传三，用的培养基是DMEM+10%FBS 追问 呵呵，谢谢，我在网上查了好久，都没查到，那在请问一下哈，怎么确定它长到对数期了呢，因为我们要取对数期细胞做药物处理。。。谢谢哈 追答 我们实验室一般是这样判断，先等细胞铺满培养瓶的90%后，传代，再至铺满培养瓶的50—60%时为对数期，进行转染或其它处理 本回答由提问者推荐
HBV+的？ 和HepG2一样DMEM+10%FBS就可以了吧
huh7与和hepg2两个细胞系的区别主要是：1、来源不同Huh7人肝癌细胞系是由Naka bayashi等人建立的，细胞源自一个日本男性高分化肝细胞肝癌；HepG2来源于高加索地区一个15岁白人的肝癌组织。2、类型不同Huh7人肝癌细胞系是高分化肝细胞肝癌；HepG2组织类型为肝母细胞瘤。3、分泌物不同Huh7人肝癌细胞系能产生一些细胞质蛋白，如白蛋白、a抗胰蛋白酶、AFP等。HepG2细胞系可分泌ALB、a2-MG等，适合用于肝细胞代谢方面的研究。扩展资料：肿瘤细胞培养技术要点1、取材材料主要来源于外科手术或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。其培养方法及冻存方法同前述正常组织。2、成e68a84e799bee5baa6e997aee7ad9431333431343064纤维细胞排除在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞，培养时能与瘤细胞同时生长，并常压过癌细胞，导致癌细胞生长受阻以至消失，应仔细排除。排除方法常有：机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率根据实验经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。一般当肿瘤组成或细胞被原代培养后，要经过对新环境的适应才能生长，因此不能局限于一般培养法，须采用一些特殊措施。如：用适宜底物，鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子，根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子，如胰岛素、氢化可的松，雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。参考资料来源：百度百科-细胞系参考资料来源：百度百科-HepG2细胞
huh7与和hepg2两个细胞7a64e78988e69d8331333431336663系的区别主要是：1、Huh7人肝癌细胞系是由Naka bayashi等人建立的，细胞源自一个日本男性高分化肝细胞肝癌，HBV阴性，能产生一些细胞质蛋白，如白蛋白、a抗胰蛋白酶、AFP等。2、HepG2来源于高加索地区一个15岁白人的肝癌组织，该细胞系可分泌ALB、a2-MG等，由于来源的肝癌组织类型为肝母细胞瘤，因此适合用于肝细胞代谢方面的研究。当HuH-7人肝癌细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞，在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min，弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为4-6×106/ml，将细胞悬液分装到冻存管中。细胞系指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。（由此便引申出了后来的有限细胞系、无限细胞系），因此，细胞系狭义的是指可连续传代的细胞，广义是指可传代的细胞。扩展资料：关于细胞系建立要求：组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。细胞生物学检测：了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、用量以及适宜PH值。参考资料：百度百科-HepG2细胞参考资料：百度百科-细胞系参考资料：中国生物器材网- HuH-7人肝癌细胞 本回答被网友采纳
huh7与和hepg2两个细胞系的区别主要是 Huh7人肝知癌细胞系是由Naka bayashi等人建立的，细胞源自一个日本男性高分化肝细胞肝癌，HBV阴性，能产生一些细胞质蛋白，如白蛋白、a抗胰道蛋白酶、AFP等。 HepG2来源于高加索地区一个15岁白人的肝癌组织，该细胞系可分泌ALB、a2-MG等，内由于来源的肝癌组织类型为肝母细胞瘤，因此适合用于肝细胞代谢方面的研究容。 本回答被提问者和网友采纳
有的，有少量百的表达。 Hela细胞中有少量度p53mRNA表达。 --参考自《野生型p53基因问抑制Hela细胞生长的答研究》 HepG-2中也有p53的表达。 --参考自《专HepG2与HepG2.2.15细胞中P53表达及活性属的比较》